尊龙凯时在细胞研究领域的应用不断扩展，了解细胞系和细胞株的定义及其建立要求是开展相关工作的基础。

一、概念

1. 细胞系（Cell Line）：当原代培养成功经过首次传代后，所形成的细胞群体被称为细胞系。这些细胞为原代培养物中所含细胞的世系。

2. 细胞株（Cell Strain）：从原代培养物或细胞系中，通过选择或克隆的方法获得的具有特定特性或标志物的细胞称为细胞株。细胞株的特征必须在整个培养期间保持不变。若细胞株不可再传代或传代次数有限，则称为有限细胞株（finite cell strain）；若可以无限传代，则称为连续细胞株（continuous cell strain）。对于人类肿瘤细胞，若其在体外培养超过六个月且生长稳定，可以称为连续性株或系。

二、建立细胞系（或株）的要求

细胞是否被认可为已鉴定的细胞，依具体情况而定，并无统一规定。对于原代培养细胞，供体的均一性、取材部位及组织类型的稳定性是关键因素。特别是在长期培养或反复传代的情况下，需仔细说明以下几点：

1. 组织来源：需注明细胞供体所属物种（人或动物）、个体性别与年龄，以及取材的器官或组织。如果为肿瘤组织，还需要提供临床及病理诊断、病历号等信息。
2. 细胞生物学检测：了解细胞的一般及特殊生物学特性，包括其形态、特异性结构、生长曲线和分裂指标、倍增时间和接种率等。对于肿瘤细胞，需进行软琼脂培养、异体接种致瘤实验及正常组织侵润力的检测，以证明来源于原肿瘤并保持恶性特征。
3. 培养条件和方法：应详细说明细胞系（或株）所需的生存环境，包括培养基、血清种类、用量及适宜的pH值。

三、细胞建立的要点与基本过程

（一）肿瘤细胞培养技术要点

1. 取材：材料主要来源于外科手术或活检。取材时需避免坏死组织，应选择瘤细胞集中且活力良好的部分，如转移淋巴结或胸腹水。取材后需尽快进行培养，如无法立即培养，可进行冻存，方法同正规组织。

2. 成纤维细胞的排除：肿瘤组织中常混杂成纤维细胞，这类细胞在培养中与肿瘤细胞共同生长，可能会妨碍肿瘤细胞的生长。因此，需通过机械刮除、反复贴壁、消化排除及胶原酶消化等方式排除成纤维细胞。

3. 提高肿瘤细胞存活率和生长率：根据经验，肿瘤细胞在体外培养较难，因此建立能传代的肿瘤细胞系需要采取特定措施。可选用适宜的底物，如鼠尾胶原，或加入细胞生长因子（如胰岛素、氢化可的松、雌激素等）来优化细胞培养条件，也可考虑动物媒介培养。

（二）人类淋巴母细胞建株方法

1. 在离心管中加入4ml肝素抗凝血，随后添加2ml RPMI 1640培养基。
2. 轻轻混匀后，沿管壁缓慢加入至含有4ml淋巴细胞分离液的液面，静置30分钟。
3. 以1500rpm离心15分钟，收集白细胞层（第二层）至新的离心管中。
4. 用RPMI 1640培养基清洗白细胞两次，每次加5ml。
5. 将清洗后的白细胞接种于1ml RPMI 1640培养基中，加入10μl环胞霉素和100μl的EB病毒液，轻轻混匀。
6. 在37℃水浴摇床上震荡40次/分钟，持续3小时。
7. 再次以1500rpm离心15分钟，将细胞接种到1ml含有谷氨酰胺的培养基中，加入10μl环胞霉素，轻轻混匀，在37℃培养。
8. 5天后观察细胞转化与生长情况，决定是否进行半量换液，通常进行1-2次，以维持环胞霉素的浓度。
9. 当转化细胞数量明显增加且出现细胞团块后，转移至25ml细胞培养瓶中，加入1-2ml培养基，继续在37℃培养10-15天，每3-4天观察一次，决定是否需要换液或传代。
10. 细胞数达到一定数量后进行冻存，冻存前应进行核型分析并存档。

通过遵循上述步骤并结合尊龙凯时的实验室技术，您可以有效建立并维护细胞系或细胞株，为生命科学研究提供强有力的支持。