培养细胞的条件和步骤至关重要，以下是细胞培养的详细内容，以确保细胞在实验中达到最佳状态。

培养条件

所用培养基为1640，加入10% FBS和1% PS，培养方式包括贴壁和悬浮，适宜的温度为37℃。

传代方法

建议第一次传代比例为1:2。传代后，每两天更换培养液，以保证细胞的健康生长。

细胞处理和观察

收到细胞后，立即使用75%酒精对培养瓶外壁进行消毒，随后在超净工作台中进行无菌操作。将细胞放置于37℃、5% CO2的培养箱内静置3-4小时，以帮助细胞稳态。使用显微镜观察细胞生长情况，拍照保存不同倍数的细胞图像（推荐40x、100x、200x各一张）。前三天的照片为售后服务的重要依据，若未提供照片则默认为细胞状态良好。

细胞培养步骤

细胞传代的步骤如下：

1. 弃去培养基后，使用不含钙、镁的PBS对细胞进行1-2次清洗。
2. 加入0.25%胰蛋白酶消化液约1-2ml，置于37℃培养箱消化1-2分钟，显微镜下观察细胞变化，若细胞变圆、脱落，迅速加5ml完全培养基结束消化。
3. 轻轻吹打细胞，使其完全脱落，转移至15ml离心管中，1000RPM离心5分钟，弃去上清，重悬细胞于1-2ml完全培养基中。
4. 根据需要进行传代，通常按1:2比例分瓶，补充新的完全培养基至每瓶5-8ml，然后放入37℃、5% CO2培养箱中继续培养。

悬浮细胞的传代

悬浮细胞的传代步骤分为半换液法和离心换液法。如需分瓶，可以收集细胞悬液至离心管中，1000 RPM离心5分钟后，弃去上清，重悬后分至新的T25培养瓶中，添加新的完全培养基。

细胞的冻存与复苏

细胞生长至覆盖培养瓶的80%面积时，使用PBS清洗一次，添加胰蛋白酶消化。消化完成后，离心去除上清，加入无血清冻存液混匀后置于冻存管中。冻存细胞应直接放入-80℃冰箱，24小时后可转入液氮罐中保存。

注意事项

在细胞运输过程中，有些细胞可能会因贴壁不牢而脱落。这种情况是正常的，若脱落较多，需对培养瓶内液体进行收集和处理。务必保持无菌状态，以确保细胞的安全和活力。

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