### 人β干扰素 (IFN-β) Elisa试剂盒使用说明

本试剂盒仅限于科学研究用途，不可用于医学诊断。其检测原理为采用双抗体一步夹心法的酶联免疫吸附试验（ELISA）。在预先包被adropin (AD) 抗体的微孔板中，逐步加入样本、标准品及HRP标记的检测抗体，经过温育及彻底洗涤后，使用底物TMB显色。在过氧化物酶的催化下，TMB先转化为蓝色，再在酸的作用下变为最终的黄色。样品中adropin (AD) 的浓度与颜色深浅呈正相关，通过酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），进而计算样品浓度。

### 样品收集、处理及保存方法

1. **血清**：使用无热原和内毒素的试管，操作过程中避免细胞刺激，收集血液后以3000转离心10分钟，将血清与红细胞小心分离。

2. **血浆**：使用EDTA、柠檬酸盐或肝素作为抗凝剂，3000转离心30分钟后取上清。

3. **细胞上清液**：3000转离心10分钟以去除颗粒及聚合物。

4. **组织匀浆**：将组织与适量生理盐水捣碎，3000转离心10分钟后取上清。

5. **保存**：若样本未即时检测，应按单次用量分装，置于-20℃冷冻，避免反复冻融。在室温下解冻，并确保样品充分均匀。

### 自备物品

1. 酶标仪（450nm）

2. 高精度加样器与枪头：05-10μL、2-20μL、20-200μL、200-1000μL

3. 37℃恒温箱

### 操作注意事项

1. 试剂盒需储存在2-8℃，使用前应在室温下平衡20分钟。浓缩洗涤液取出时可能出现结晶，水浴加热后再使用。

2. 实验中未使用的板条应立即放回自封袋中，在低温干燥条件下密封保存。

3. 标准品S0号（浓度为0）可作为阴性对照；注意样本已按说明书稀释5倍，最终结果需乘以5以获得实际浓度。

4. 实验过程需严格遵循说明书中的时间、加液量及顺序进行温育。

5. 所有液体组分在使用前需充分摇匀。

### 试剂盒组成

**96孔配置** / **48孔配置**

微孔酶标板：12孔×8条 / 12孔×4条

标准品：03mL×6管 / 03mL×6管

样本稀释液：6mL / 3mL

检测抗体-HRP：10mL / 5mL

20×洗涤缓冲液：25mL / 15mL（按说明书稀释）

底物A：6mL / 3mL

底物B：6mL / 3mL

终止液：6mL / 3mL

封板膜：2张 / 2张

说明书：1份 / 1份

自封袋：1个 / 1个

**标准品（S0-S5）浓度依次为：0、25、50、100、200、400pg/mL**

### 特殊试剂的准备

**20×洗涤缓冲液稀释**：以蒸馏水按1:20比例稀释，即1份的20×洗涤缓冲液加入19份蒸馏水。

### 洗板方法

1. **手工洗板**：甩尽孔内液体，每孔加满洗涤液，静置1分钟后再次甩去液体，拍干，重复洗涤5次。

2. **自动洗板机**：每孔注入洗液350μL，浸泡1分钟，洗涤5次。

### 操作步骤

1. 从室温平衡20分钟后的铝箔袋中取出所需板条，其余用自封袋密封并放回4℃。

2. 设置标准品孔与样本孔，各标准品孔加入不同浓度的标准品50μL。

3. 样本孔先添加待测样本10μL，再加入样本稀释液40μL；空白孔不加样本。

4. 除空白孔外，标准品及样本孔中每孔加入HRP标记的检测抗体100μL，封住反应孔，放入37℃水浴或恒温箱温育60分钟。

5. 丢弃液体，拍干后每孔加入洗涤液，静置1分钟，重复洗涤5次（亦可用洗板机）。

6. 每孔加入底物A与B各50μL，避光在37℃孵育15分钟。

7. 每孔添加终止液50μL，并在15分钟内测定各孔OD值，波长为450nm。

### 结果判断

绘制标准曲线：在Excel工作表中，以标准品浓度为横坐标，OD值为纵坐标绘制线性回归曲线，依曲线方程计算各样本浓度。

### 试剂盒性能

1. **准确性**：标准品线性回归与预期浓度相关系数R值≥0.9900。

2. **灵敏度**：最低检测浓度<10pg/mL。

3. **特异性**：不与其他可溶性结构类似物交叉反应。

4. **重复性**：板内、板间变异系数均<15%。

5. **贮藏**：需在2-8℃下存放，避光防潮。

6. **有效期**：6个月。

### 免责声明

1. 本试剂盒仅供研究用途，不得用于临床或人体实验，所有后果由实验者自行承担，尊龙凯时不承担任何责任。

2. 实验过程中请严格遵循说明书的操作要求，任何违反指引的后果由实验者负责。